PCR实验室检测步骤有哪些

新型冠状病毒性肺炎全球抗疫情况严峻，在我国对抗病毒的交锋中，病毒检验是战“疫”的重要环节，阳型病例的确诊关键主要依靠实验室检测。根据我国生物安全防护要求，通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素检测要求适用于“生物安全防护三级实验室”。博泰小编带您了解PCR实验室检测的相关信息：

核酸检测是诊断新冠肺炎的“金标准”，而检验步骤中的每一个环节都要小心谨慎。在实际操作中，实验员必须“一个一个地开盖加样和核酸提取”。P3实验室是检测人员与病毒零距离接触的地方，实验室需要完全密封，房间内处于空气负压状态，人流、物流、气流单向流动，确保在里面的污染物不会泄漏到外面而造成污染。

1、采集检测样本，如咽拭子或肛拭子。检测样本通过带互锁装置及紫外线杀毒功能的传递窗进入到P3实验室，可有效避免传递样本时污染物的流通，不污染实验室外环境。

2、样本在水浴箱经半小时56摄氏高温灭活，使病毒蛋白丧失生理活性，不再具备感染、发病和繁育的能力。

3、在标本采集处理间，实验员取得灭活后的样本时，首先进行震荡，接着开盖加样。样本在开盖转移的过程中，病毒很容易曝露在实验室的空气中，与实验员基本上是零距离接触。

4、人工核酸提取流程繁杂，虽可以使用仪器辅助，但由于比对的需要，往往要加以人工操作，这需要反复进行离心、加试剂、洗涤等10多个步骤。

5、提取的核酸送至核酸检测室内，就需要上仪器设备了。把提取的核酸加入到扩增试剂中，通过荧光PCR仪进行RT PCR反应，将提取的核酸逆转录成DNA,再以DNA为模版，对特定位点进行扩增，利用不同的温度进行变性、退火和延伸，对每个循环采集荧光值，45个循环后绘制荧光曲线，用时约110分钟，实验员根据荧光曲线分析判断结果的阴性和阳性。

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