如何建设标准的PCR实验室

临床基因扩增实验又称PCR实验，可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的疫病诊断。博泰小编带大家了解如何建设标准的PCR实验室。

一、PCR实验室平面布局

临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。

二、实验室空调通风系统设计及压力控制

1.试剂贮存和准备区

该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。

对气流压力的控制，本区并没有严格的要求。

2.标本制备区

该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时CDNA的合成。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。

3.扩增反应混合物配制和扩增区

该区域主要进行的操作为DNA或CDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的CDNA的加入和主反应混合液制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。

4.扩增产物分析区

该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。

本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。

三、污染的预防与控制

1.工作区域的严格划分

各个实验区域设置合理。各个实验区域要有明显的标记，以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。

2.合理的系统设置

合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统。严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。

3.规范的操作

临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作。在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。

4.严格的管理

严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门。尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，。

5.完备的实验室配套设施

完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。

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